2014年3月至4月在湖北省肉牛场发生牛腹泻。无菌采集腹泻进行细菌分离，涂片，染色和显微镜检查，及其形态特征，培养特性，生化特性和致病性。 研究性别等生物学特征，接下来小编简单介绍一篇兽医论文。

　　大肠埃希氏菌(E. coli)通常称为大肠杆菌，由Escherich于1885年首次在动物的肠道内发现[1]。在大肠杆菌中，大多数是不致病的肠道常在菌，少数具有致病性。大肠杆菌病又称大肠杆菌性腹泻，是由致病性大肠杆菌引起的一种急性传染病。自从1894年大肠杆菌病首次在瑞典、荷兰、法国等养殖业发达国家暴发以来，给世界畜牧业造成了巨大损失[2]。该病的主要特征为败血症和严重腹泻、脱水，引起幼畜大量死亡或发育不良。随着我国畜牧业规模化、集约化饲养模式的发展，该病的发病率和死亡率逐年增加。

　　2014年3～4月间，湖北省某规模化肉牛场发生了以高热，食欲废绝，排水样、糊状或褐色粪便，少数排血样粪便，最终消瘦乃至死亡等症状的传染性疾病，全场发病率达30%，犊牛发病率高达76%，死亡率达5%。

　　为了弄清本次发病的主要病因，无菌采集病牛腹泻物，从中分离出致病性大肠杆菌，并对分离获得的菌株进行了生物学特性研究。

　　1 材料与方法

　　1.1 病料

　　病牛腹泻物。无菌采集，采样人带一次性无菌手套直肠采集，保证一头牛一个手套，防止交叉污染。

　　1.2 培养基的制备

　　1.2.1 普通琼脂培养基 量取牛肉汤500 mL，加入5 g蛋白胨、2.5 g氯化钠，放蒸汽锅内加温30 min，调整pH为7.2～7.4，再置蒸汽锅内加热30 min，用滤纸过滤。加入15 g的琼脂，置蒸汽锅内加热至完全溶解。分装于锥形瓶中，置高压蒸汽锅内， 121 ℃灭菌20 min。待冷却至50 ℃左右时倒入灭菌的培养皿中，完全冷却后4 ℃保存备用。

　　1.2.2 血液琼脂培养基 取上述经灭菌后的普通琼脂冷至50 ℃左右的普通琼脂100 mL，无菌加入家兔脱纤维血液15 mL，混匀后倒入灭菌的培养皿中，完全冷却后4 ℃保存备用。

　　1.2.3 伊红美兰琼脂培养基 取上述经灭菌后的普通琼脂100 mL溶解灭菌，并冷却至60 ℃左右，分别加入灭菌的20%乳糖溶液2 mL、2%伊红水溶液2 mL及5%美蓝水溶液1 mL，混匀后倾入灭菌平皿中，完全冷却后4 ℃保存备用。

　　1.2.4 SS琼脂 牛肉膏2.5 g、蛋白胨2.5 g、琼脂9 g加入500 mL蒸馏水中，加热溶解。再加入胆盐4 g、乳糖5 g、枸橼酸钠6 g、硫代硫酸钠6 g及枸橼酸铁0.25 g，微热加温使其全部溶解，调整pH为7.2。混匀后倾入灭菌平皿中，完全冷却后4 ℃保存备用。

　　1.2.5 麦康凯培养基 取蛋白胨2.0 g、氯化钠0.5 g、乳糖1.0 g、胆盐0.5 g和100 mL蒸馏水，调整pH为7.4，加入2.5g琼脂，分装于锥形瓶中，121 ℃灭菌15 min，待冷至50 ℃左右时，加入灭菌的1%中性红水溶液0.5 mL，摇匀后倾入培养皿，完全冷却后4 ℃保存备用。

　　1.2.6三糖铁培养基 取适量三糖铁琼脂粉，加入100 mL蒸馏水，加热溶解，115 ℃高压蒸汽灭菌20 min，待冷至50 ℃左右时分装试管，使成底层较深的斜面。

　　1.3 试剂

　　微量生化鉴定管为杭州微生物试剂有限公司产品，购自武汉市某商业公司。

　　1.4 试验动物

　　8～10 g SPF昆明鼠，购自湖北省疾病预防控制中心实验动物中心。

　　1.5 细菌的分离培养与鉴定

　　采用需氧和厌氧(缸内燃烛法)两种方法，利用普通琼脂培养基从病料中分离细菌。对不同形态的菌落进行涂片、染色、镜检和纯培养。将纯培养菌接种于5%血液营养琼脂培养基、SS琼脂培养基、伊红美蓝培养基、三糖铁培养基、麦康凯培养基，37 ℃培养24 h，观察细菌培养特性。

　　1.6 分离菌生化试验

　　取生长良好的红色菌落接种于营养肉汤，37 ℃培养 24 h，按常规方法进行生化试验，主要包括葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露糖、蔗糖的发酵试验，硫化氢、丙二酸盐利用、枸橼酸盐利用、鸟氨酸盐脱羧酶、赖氨酸脱羧酶、葡萄糖磷酸盐、卫茅醇试验等。

　　1.7 动物试验

　　将细菌纯培养物接种于普通肉汤中培养24h，分别以口腔和腹腔途径各接种5只SPF昆明小鼠，每只接种0.2 mL(约含108 CFU/mL)菌液，另取2只作为对照，隔离饲养观察。

　　2 结果与分析

　　2.1 分离菌的形态

　　自患牛腹泻物中分离获得纯化菌株1株。该分离菌为兼性厌氧菌，在普通营养琼脂培养基上就可以生长，显微镜下可以见到菌体短小，两端钝圆、着色较深， 无芽孢，多呈单个排列， 个别形成短链状排列，革兰氏染色阴性(图1)。

　　阅读期刊：中国兽医科学

　　《中国兽医科学》是由农业部主管、中国农业科学院兰州兽医研究所主办的兽医专业学术性期刊。继1999年获首届国家期刊奖、2003年获第二届国家期刊奖百种重点期刊奖之后，2005年又荣获第三届国家期刊奖提名奖。