近日，中国西医科学院广安门病院糖尿病研究室研究人员颁发论文，旨在建立以促甲状腺激素受体（thyroidstimulatinghormonereceptor，TSHR）A亚单元（TSHR289）基因片段为免疫原的重组腺病毒载体，以期成立Graves病（Gravessdisease，）动物模子，为切磋中药复方对的防治感化供给前提。研究指出，成功建立了过表达人TSHR289基因的重组腺病毒载体，动物尝试证明该腺病毒诱发本身免疫，发生TRAb。为下一步体内药物医治试验供给了前提。该文颁发在2014年第04期《重庆医科大学学报》上。

　　操纵堆叠PCR手艺从pSV2neoECE-TSHR289-6H-dhfr质粒中将目标基因TSHR289扩增至载体attB1-Kozak-TSHR289/6xHis/IRES/eGFP-attB2，琼脂糖凝胶电泳收受接管，GatewayR手艺建立重组腺病毒载体（pAV.EX1d-TSHR289/6xHis/IRES/eGFP，pAdTSHR289/6xHis），到大肠杆菌Stbl3中，菌落PCR筛选阳性克隆、测序判定。将pAd-TSHR289/6xHis转染HEK293A细胞包装腺病毒，CsCl梯度离心法纯化腺病毒，TCID50法检测病毒滴度。RT-PCR法检测HEK293A中TSHR289的mRNA表达。使用该腺病毒免疫BALB/c小鼠制备模子。

　　菌落PCR筛选阳性克隆，测序证明建立准确；细胞传染腺病毒后呈现较着细胞病变及加强型绿色荧光卵白（enhancedgreenfluorescentprotein，eGFP）表达；RT-PCR检测重组腺病毒转染的细胞中TSHR289的mRNA表达量是未转染的285倍；尝试测抱病毒滴度为3.16×1010PFU/ml；BALB/c小鼠免疫第10周T4、TSHR抗体（TRAb）阳性率7/10。

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